ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution(5x)

CatalogNumber：LC110R

01/產品概述

　　基于人類免疫缺陷病毒-1（HIV-1）的慢病毒載體是一種用于基因轉移研究的載體。慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達目的序列的效果。在感染能力方面，慢病毒載體可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞。對于一些較難轉染的細胞，如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等，使用慢病毒載體能大大提高目的基因或目的shRNA的轉導效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加，能夠比較方便快捷地實現目的基因或目的shRNA的長期、穩定表達。在體外實驗及體內實驗的研究中，慢病毒己經成為表達外源基因或外源shRNA的常用載體形式之一，并且正在獲得越來越廣泛的應用。

　　LeapWal ViralStars 慢病毒濃縮試劑（5x）是針對慢病毒富集而優化的聚合物材料，它提供了一種簡單、快速、高效的慢病毒顆粒濃縮方法。只需將慢病毒上清液與慢病毒濃縮試劑按比例混合，短時間孵育，采用標準離心機進行離心即可得到慢病毒顆粒沉淀。超濾、超速離心法等病毒濃縮法，操作時間長，步驟繁瑣，且通常會有細胞碎片和血清蛋白等的污染，病毒純度低。使用本產品進行病毒濃縮后，病毒滴度可提高10-100倍，病毒回收率最高可達約90%，病毒損失少，并且病毒在濃縮過程中能保持病毒生物活性。整個實驗過程可在4小時內快速完成，無需超速離心即可獲得出色的回收效率。

02/產品組分

03/保存條件

冰袋（wetice）運輸。4℃保存，有效期12個月。

04/產品特點

　　簡單快速——操作簡單，無需超速離心，確保活性，實驗耗時不超過4小時

　　濃縮效果優——病毒滴度可濃縮10-100倍以上（TransductionUnits/mL）

　　回收效率高——慢病毒回收效率高達90%以上

　　應用范圍廣——適用于所有類型的慢病毒顆粒

05/實驗流程概要

06/實驗步驟

　　1.將含有慢病毒顆粒的培養基轉移至無菌容器中，300xg離心10分鐘以除去細胞碎片。

　　?為保證病毒活性，濃縮前的病毒上清液應盡量選擇新鮮收集的病毒原液。

　　2.使用0.22μm過濾器過濾上清液至無菌容器中。

　　?如果使用濾膜過濾，推薦使用低蛋白結合力的纖維素醋酸酯或聚醚砜（PES）膜，不推薦使用硝酸纖維素膜（NC）。

　　3.向每4體積含慢病毒的上清液中加入1體積慢病毒濃縮試劑（5x），使慢病毒濃縮試劑（5x）稀釋為工作濃度（1x）。

　　4.將上述混合物于4℃搖床中慢速孵育3小時或過夜。

　　?慢病毒顆粒在4℃可穩定長達4天。

　　5.將混合物4℃4000xg離心25分鐘。離心后，慢病毒顆粒可能在容器底部顯示為米色或白色沉淀。

　　6.小心棄去上清液，4℃4000xg離心5分鐘，再次棄盡殘余液體，應盡量避免吸走沉淀物，該沉淀物即為慢病毒顆粒。

　　7.用初始體積（原上清液體積）1/10-1/100預冷的慢病毒保存液重懸病毒顆粒，使用移液器小心吹打，重懸慢病毒顆粒。

　　?重懸病毒沉淀時，吹打操作要輕柔，可選擇慢病毒保存液（LS110R）、*培養基或FBS重懸慢病毒。

　　8.小體積分裝慢病毒，儲存于-80℃冰箱或液氮中，留取少量病毒測定滴度。

　　?應盡量避免慢病毒反復凍融，否則會降低病毒滴度。

07/適用范圍

　　LeapWal ViralStars 慢病毒濃縮試劑（5x）適用于任何慢病毒顆粒的濃縮方法。

08/注意事項

　　1.為了您的健康安全，請規范操作，穿戴實驗服與手套開展實驗；

　　2.所有慢病毒操作均需在生物安全柜（BSL2級）中進行；

　　3.本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及治療。

09/實驗案例分析

　　1.使用10cm細胞培養皿培養ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line（CL110001），待細胞密度為60-70%左右開始包裝慢病毒；

　　2.使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit（LP110-10）進行慢病毒包裝（陽性對照質粒含GFP綠色熒光蛋白基因），具體包裝步驟按照說明書進行；

　　3.準備目的細胞：將需感染的目的細胞293T以(1-3)x10^4的密度接種于96孔板內，次日即可進行慢病毒感染；

　　4.待病毒包裝48h后，收集慢病毒上清液約9mL，300xg離心10分鐘以除去細胞碎片，使用0.22μm過濾器過濾上清液至無菌容器中。

　　5.取1mL病毒上清液作為濃縮前對照1*，剩余8mL病毒上清液中加入2mL本產品進行慢病毒濃縮，具體慢病毒濃縮步驟按照說明書進行，保留1mL濃縮后應棄去的上清液作為對照2#，使用800μL *培養基輕輕重懸慢病毒顆粒，即可得到濃縮10倍的慢病毒；

　　6.慢病毒感染目的細胞：將96孔板細胞棄去上清，每孔加入新鮮培養基100μL，Polybrene（LE110-01）0.2μL，濃縮后慢病毒100μL或對照1*（濃縮前慢病毒原液）100μL或對照2#（濃縮后應棄去的慢病毒上清液）100μL；

　　7.繼續培養細胞48h后，使用熒光顯微鏡觀察綠色熒光強度，實驗結果如圖2所示。

圖2: 慢病毒感染目的細胞293T觀察GFP表達情況。（左）濃縮10x慢病毒，（中）對照1*（濃縮前慢病毒原液），（右）對照2#（濃縮后應棄去的慢病毒上清液）。

10/其他相關產品